前言

新型冠狀病毒（2019-nCoV）疫情發(fā)生以來，受到了醫(yī)療行業(yè)的廣泛關注，各廠家都積極投入到了產(chǎn)品研發(fā)之中。

尚未能完整列示的產(chǎn)品信息，主要基于遵重企業(yè)保密性要求，或不排除純屬實驗室項目且無臨床注冊安排，以及對于所提供的技術參數(shù)資料存有疑問等原因。

從方法學原理來看，產(chǎn)品整體上可以將試劑盒分為免疫診斷與核酸檢測兩大類：

其中尤以熒光定量PCR的產(chǎn)品占據(jù)了絕對優(yōu)勢，主要因為相關研發(fā)技術體系不算最復雜，原料來源相對穩(wěn)定充裕，更容易快速研發(fā)成功。同時，可以看出一批分子技術類企業(yè)的快速發(fā)展與注冊體系的日趨完善。

接下來我們將分別了解一下相關方法學的優(yōu)劣勢，以便各檢測機構(gòu)能夠更好地選擇適用性強的新冠（2019-nCoV）檢測產(chǎn)品：

目錄

1. 免疫診斷

1.1. 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

1.2. 化學發(fā)光技術（CLIA）

1.3. 免疫膠體金標記技術（ICS）

2. 核酸診斷

2.1. 熒光定量PCR

2.2. 數(shù)字PCR

2.3. 高通量測序（NGS）

2.4. 恒溫擴增技術

3. 總結(jié)

附件一：20家新型冠狀病毒檢測試劑盒獲證企業(yè)名單

附件二：126家新型冠狀病毒核酸檢測試劑生產(chǎn)企業(yè)名單（持續(xù)更新）

附件三：21家新型冠狀病毒免疫檢測試劑生產(chǎn)企業(yè)名單（持續(xù)更新）

正文

1. 免疫診斷

免疫診斷是應用抗原-抗體特異性結(jié)合原理，使用特定標記物進行分析檢測的技術。由于窗口期（IgM，參考SARS約10天）的存在，該技術難以在感染初期檢出陽性結(jié)果。體內(nèi)干擾因素（異嗜性抗體、類風濕因子等）存在、患者免疫力低下、HOOK效應等也會導致假陰性結(jié)果出現(xiàn)。另外，免疫診斷技術敏感性較好但特異性相對較差，檢測中可能會現(xiàn)假陽性結(jié)果。雖然其敏感性和特異性相較核酸檢測處于劣勢，但由于該技術對實驗室設備和人員要求較低，適合基層開展規(guī)模檢測，故建議將免疫檢測技術應用于基層的大范圍初篩，之后再以核酸檢測進行確診。

1.1.?酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

敏感性高，特異性較強，既可檢測抗體，又能測定可溶性抗原。無需特殊儀器，且操作簡便，檢測成本低，利于普及。但其大多為人工操作，檢測時間較長，通量受96孔板的限制，加上對照、空白及質(zhì)控的使用，實際患者樣本檢測數(shù)量少于96例。同時因其多為開放的操作環(huán)境，更容易造成污染，面對新冠病毒，這是非常需要重視的風險。目前了解情況來看，有4家品牌宣布成功研發(fā)出了該產(chǎn)品，出于經(jīng)濟性等因素的考慮，此技術很適合基層檢測機構(gòu)開展大規(guī)模篩查，期待有更多廠家能夠研發(fā)生產(chǎn)相關產(chǎn)品。

1.2.?化學發(fā)光技術（CLIA）

目前最先進的免疫檢測技術之一，具有靈敏度高、特異性強、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優(yōu)點；但往往需要品牌限定的化學發(fā)光儀，試劑成本相對較高且無法開放通用，眾多小型實驗室難以承受其成本壓力。目前已有幾家代表性發(fā)光試劑廠家宣布研發(fā)出9款相關產(chǎn)品，配合對應的化學發(fā)光儀，檢測速度可達200test/h以上，甚至有報道理論速度達到300test/h，獲得審批應用于臨床后有望明顯提升檢測效率。

1.3.?免疫膠體金標記技術（ICS）

操作簡單、反應快速（通常數(shù)分鐘即可判讀結(jié)果）、敏感度高，但由于其靈敏度較差、無法定量檢測等弱點，限制了其應用范圍，更適用于床旁檢測及快速篩查目的。目前已經(jīng)有超15家品牌宣布成功研發(fā)出相關的產(chǎn)品，且均能在15分鐘內(nèi)檢出結(jié)果，如果能夠應用于臨床，對于新冠病毒輔助篩查將有重要作用。

2.?核酸檢測

主要指聚合酶鏈式反應，即通常所說的PCR檢測，優(yōu)勢在于其他方法學難以企及的極高靈敏度，同時特異性強、擴增環(huán)節(jié)自動化程度高，窗口期較短，一般3-5天（理論上核酸只要感染粘膜，就可以檢測到），相對封閉的操作環(huán)境可以降低樣本對環(huán)境的污染。

但其劣勢在于對實驗室硬件設備以及人員都有較高的特殊要求；整體檢測時間較長，一輪檢測常需要2-3小時以上；多數(shù)PCR儀通量受限于96孔，算上內(nèi)標的使用，實際患者樣本檢測量更少。同時，PCR最大的問題是極易污染，極其微量的污染即可引發(fā)假陽性的產(chǎn)生。

疫情爆發(fā)以來，有不完全統(tǒng)計資料提示“核酸檢測對于陽性病人，最高有30~50%的陽性率。也就是說，部分患者核酸檢測結(jié)果為陰性，但在臨床上被確認為疑似新冠肺炎，屬于假陰性。甚至有報道稱個別患者7次核酸檢測均為陰性，直到第8次才檢出陽性結(jié)果，因此部分臨床醫(yī)生和民眾開始質(zhì)疑這項檢測無法發(fā)揮作用。關于這個問題我們也分析了其原因：

1、2019-nCoV病毒特點：行業(yè)關于新冠病毒的認知還在逐步增長中，患者感染病毒后，體液中病毒的含量、分布與癥狀嚴重程度是否呈線性正相關尚不明確。如果有臨床癥狀，但病毒在肺部尚未快速復制釋放，此時采樣，就有可能因采集的病毒量不足無法確診。尤其在發(fā)病早期可能沒有咳嗽，上呼吸道、包括鼻咽部的病毒量很少，檢測結(jié)果很可能為陰性。但這樣患者通常傳染性也小，因為上呼吸道沒有檢測到，提示其傳染性不強。

2、檢測前階段影響：出于可操作性的限制，目前比較常見的采樣方法是使用鼻咽拭子、痰液或肺泡灌洗液采集，其中最常用的是鼻咽拭子。鼻咽拭子采集有先天的局限性，隨機性較強；其次試劑盒要求病毒滅活，而新冠作為RNA病毒，穩(wěn)定性較低。而采樣后的核酸提取效率一定程度上會受個體差異、采樣操作及實驗操作規(guī)范程度等影響。

在臨床檢測中，采樣→送檢→滅活→提取→檢測，其中任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都有可能導致無法提取出足量、有效的病毒核酸，導致后續(xù)檢測出現(xiàn)假陰性結(jié)果。建議有條件的醫(yī)療機構(gòu)，選擇以深部痰液樣本為佳，重癥氣管插管病人以肺泡灌洗液為準。

3、檢測結(jié)果解讀：有些試劑說明書上描述需2個靶點同時陽性才可報陽性，而新冠作為RNA病毒并不穩(wěn)定，易發(fā)生變異，將只有1個靶點陽性的結(jié)果報為陰性是否也是導致假陰性的原因之一，值得進一步研究。另外，部分結(jié)果正確判斷需要有經(jīng)驗的實驗人員對反應曲線進行調(diào)整。

4、檢測試劑盒的設計與驗證：1月26日，國家食藥監(jiān)局啟動應急審批程序，僅4天就批準了4個試劑盒產(chǎn)品，用于緊急應對此次疫情。據(jù)報道，目前國家食藥監(jiān)局已批準了9個新冠病毒試劑盒，同時有更多試劑盒正在跟進中。

通常，檢測試劑盒作為三類醫(yī)療器械，需要經(jīng)過廣泛的臨床試驗，在靈敏度、特異性等多項指標達到要求后，才可由國家食藥監(jiān)局批準上市進入臨床，通常需花費數(shù)月乃至數(shù)年時間。此次疫情暴發(fā)突然，廠家在試劑盒開發(fā)中拿不到也來不及用足夠的臨床樣本進行驗證，而臨床應用需求迫在眉睫，因此倉促上陣的核酸檢測試劑盒質(zhì)量可能參差不齊，穩(wěn)定可靠性尚存疑。

采樣器械、實驗耗材、檢測儀器不同、人員操作，都可能影響試劑盒的性能表現(xiàn)，但隨著這些因素逐步磨合，陽性率也會提升改善。

綜合來看，雖然核酸試劑盒目前尚有不盡如人意的地方，但因其在感染診斷中病原體檢測的核心價值和方法學優(yōu)勢，以及多方進一步改進之下，可以預見核酸檢測一定始終是新型冠狀病毒（2019-nCoV）無創(chuàng)診斷的金標準，適合具有PCR資質(zhì)的專業(yè)實驗室進行確診試驗。

2.1.?熒光定量PCR

擴增檢測同時完成，自動化程度高，具有靈敏度高、特異性強、重復性好等優(yōu)點，但使用成本通常較高，適合具有一定規(guī)模擁有熒光定量PCR儀的實驗室。

目前提供了靈敏度參數(shù)的10個廠家中，達到100 copies/mL的有3家，達到500 copies/mL有4家，另外還有3家達到1000 copies/mL，更優(yōu)秀的靈敏度意味著能夠在更早期發(fā)現(xiàn)病毒攜帶者，同時靈敏度的差異也可能導致結(jié)果不同，因此當使用多種試劑檢測結(jié)果不一致時，需考慮靈敏度的因素。由于新型冠狀病毒（2019-nCoV）屬于RNA病毒，容易發(fā)生變異，如果只檢測單一核酸靶點，容易產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

不過我們欣喜地發(fā)現(xiàn)大多數(shù)品牌都采用了多重PCR技術，在一次檢測過程中同時檢測多個核酸靶點，可有效提升陽性檢出率，盡可能避免漏檢的情況出現(xiàn)，當然核酸靶點的增多也會提升檢測成本，因此檢測機構(gòu)宜根據(jù)實際需求選擇最適產(chǎn)品。

2.2. 數(shù)字PCR

能夠?qū)悠返暮怂岱肿舆M行絕對定量，具有比熒光定量PCR更高的靈敏度、特異性和精確性。但同時，它也存在著一些不足，例如樣品通量很低，基本每塊芯片上萬個反應單元都是針對單一樣本分析；多個芯片的同時檢測受限制，在常規(guī)基因表達分析中不具備優(yōu)勢；基于精密儀器和復雜芯片，成本昂貴。目前有8個品牌宣布研發(fā)了相關產(chǎn)品，且均采用了多重PCR技術，有效地保證了陽性檢出率。

2.3. 高通量測序（NGS）

具有檢測準確、覆蓋全面等優(yōu)勢，但是對人員專業(yè)要求高、檢測成本高是其劣勢，另外測序數(shù)據(jù)的儲存和分析，數(shù)據(jù)的安全和信息隱私等問題也限制了其在臨床上的應用，目前更多用于科研領域。有報道利用全基因組檢測分析平臺，可以一次對幾十萬到幾萬條病毒的核酸分子進行序列測定，加速檢測速度，防止病毒變異漏檢，大幅提高疑似病例的確診準確率。測序技術和AI智能是重要的嘗試，臨床應用的可行性令人非常期待。

2.4. 恒溫擴增技術

繼PCR技術后發(fā)展起來的一門新型的體外核酸擴增技術，具有恒溫、高效、不需要特殊儀器設備等優(yōu)點，但由于其對引物設計要求特別高，檢測成本高，且結(jié)果不太穩(wěn)定等原因，目前尚未廣泛應用于臨床檢測，暫不建議用于確診試驗。

但已有部分廠家和檢測機構(gòu)正積極推進該技術在臨床上的應用，期待其能夠進一步被臨床所普遍接受。目前已有10個試劑盒產(chǎn)品宣布研發(fā)成功，且多采用雙重PCR技術，能夠檢測2個核酸靶點。

為便于比較，現(xiàn)將上述內(nèi)容匯總為一份表格：

3. 總結(jié)

疫情發(fā)展至今，仍有不少疑似病例因為檢測效率不足等原因尚未確診，因此檢測時間也成為了檢測機構(gòu)最為關心的重要因素之一。根據(jù)廠家聲稱的檢測時間統(tǒng)計可以發(fā)現(xiàn)，免疫診斷的方法以其較快的檢測速度確實更加適合基層大規(guī)模進行篩查，而相對時間較長的核酸檢測方法會更適合篩查后的確診目的。

最后，根據(jù)已收集到的信息發(fā)現(xiàn)廣東、江蘇、浙江和上海、北京產(chǎn)品相對集中，也與核酸檢測研發(fā)企業(yè)集中在這些省份有一定關系。考慮物流、技術支持等因素時，檢測機構(gòu)可適當參考。

本文的分析數(shù)據(jù)基于各家提供的技術參數(shù)，因絕大部分產(chǎn)品尚未獲得注冊證無法獲取產(chǎn)品說明書，或未取得大量的臨床驗證數(shù)據(jù)。若存在信息填報不實或差異，請及時提供準確信息，小編將及時予以更新。

附件一：新型冠狀病毒檢測試劑盒獲證企業(yè)匯總

附二：126家新型冠狀病毒核酸檢測試劑生產(chǎn)企業(yè)名單（持續(xù)更新）

附三：21家新型冠狀病毒免疫檢測試劑生產(chǎn)企業(yè)名單（持續(xù)更新）