POC(Point-of-Care)又稱即時(shí)檢測，是IVD行業(yè)的一個(gè)細(xì)分領(lǐng)域，指在采樣現(xiàn)場進(jìn)行的、利用便攜式分析儀器及配套試劑快速得到檢測結(jié)果的一種檢測方式。

POCT技術(shù)最早始于20世紀(jì)中期，由Edmonds以干化學(xué)制片測量血糖及尿糖，隨后由Ames公司將其檢測項(xiàng)目擴(kuò)大并商業(yè)化。由于方法簡便快速而得到普遍應(yīng)用。近20年來，POC檢測的發(fā)展在全球范圍內(nèi)是肉眼可見的速度在突飛猛進(jìn)。

中國自2015年P(guān)OCT第一股上市開始，以每年超過20%的速度快速增長，預(yù)計(jì)2027年整體市場超過260億元，遠(yuǎn)超全球POCT行業(yè)7.4%的發(fā)展速度，已經(jīng)是我國IVD行業(yè)增長最快的細(xì)分領(lǐng)域之一。

來源：前瞻產(chǎn)業(yè)研究院

為了更好的理解POC檢測，為其技術(shù)的發(fā)展指明方向，已有幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)估POC檢測的適用性。其中包括WHO的ASSURED標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)DA的CLIA標(biāo)準(zhǔn)，以及在新冠之后提出的STARLITE標(biāo)準(zhǔn)。

來源：//doi.org/10.3390/ijms232214110

在新冠疫情期間，POCT通過實(shí)際場景的應(yīng)用自證了其技術(shù)的成熟性和可靠性，尤其是分子POCT檢測技術(shù)的廣泛運(yùn)用。

等溫?cái)U(kuò)增(如HCA、MDA、NASBA和LAMP等)在分子POC診斷中發(fā)揮了越來越重要的作用。等溫?cái)U(kuò)增具有與qPCR相似的靈敏度和特異性，但是在快速、低成本和便攜性方面具有優(yōu)勢，因此成為在資源有限環(huán)境下使用POC檢測的理想選擇。

近幾年來，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的進(jìn)步，尤其是在實(shí)時(shí)檢測、多重?cái)U(kuò)增和基于芯片的檢測方面的發(fā)展，提高了等溫?cái)U(kuò)增的靈敏度和準(zhǔn)確性，可以說是徹底改變了POC行業(yè)，為更快、更方便的診斷鋪平了道路。

在多種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中，LAMP是最常用的方法，它可實(shí)現(xiàn)在恒定溫度（60-65oC）下對(duì)DNA或RNA靶標(biāo)進(jìn)行高效、特異和快速擴(kuò)增。在相同時(shí)間內(nèi)，LAMP擴(kuò)增 效率比傳統(tǒng) PCR高100倍。不過，LAMP技術(shù)也有一些限制，例如具有較高假陽性率，引物設(shè)計(jì)復(fù)雜、重復(fù)性不太好。

另一種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，基于核酸序列的擴(kuò)增（Nucleic acid sequence based amplification，NASBA）也越來越受歡迎，它的核心優(yōu)勢是能在更低的溫度下（~41°C）下直接擴(kuò)增RNA,只需要使用2個(gè)特異性引物P1/2，因此在引物設(shè)計(jì)方面就沒那么復(fù)雜，更容易優(yōu)化。

與使用Bst酶鏈置換活性的LAMP擴(kuò)增不同，NASBA擴(kuò)增是依賴AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase H和噬菌體T7 RNA聚合酶活性進(jìn)行的反應(yīng)。

其兩個(gè)特異性引物與目標(biāo)RNA序列雜交，并通過逆轉(zhuǎn)錄酶生成DNA的互補(bǔ)鏈（cDNA），然后將其作為模板合成多個(gè)RNA副本。新的RNA鏈和cDNA模板通過變性和再變性分離并重新連接。這一過程在反轉(zhuǎn)錄（產(chǎn)生更多的cDNA）、RNA合成和指數(shù)級(jí)RNA擴(kuò)增的循環(huán)中重復(fù)進(jìn)行，可在90分鐘內(nèi)將目標(biāo)片段擴(kuò)增10¹²倍以上。

NASBA反應(yīng)的反轉(zhuǎn)錄過程被直接合并到擴(kuò)增反應(yīng)中，因此該技術(shù)最適合分析RNA樣品。樣品中DNA、肝素、檸檬酸鹽、血紅蛋白、白蛋白和脂質(zhì)等的污染將不會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響，因而適用于可能不適合其他試驗(yàn)檢測的樣品。且反應(yīng)溫度較低，因此是細(xì)菌、病毒等多種病原微生物POC診斷的理想選擇。